医学专科开设琼脂糖凝胶电泳实验的教学体会

摘要：琼脂糖凝胶电泳是生物化学中常用的分离技术之一，在医学基础研究及分析中有广泛的应用。本文结合医学专科院校琼脂糖凝胶电泳实验的开设，对从实验前的各项准备工作到学生实验的教学过程及实验课后的思考等方面进行分析和总结，以期为今后的实验教学改革提供参考。

关键词：生物化学实验；琼脂糖凝胶电泳；教学体会

中图分类号：G642.0 文献标志码：A 文章编号：1674-9324（2014）11-0260-02

琼脂糖凝胶电泳是核酸分析常用的实验技术，是核酸研究工作中不可缺少的重要手段，广泛应用于基础理论研究、农业科学、医学卫生、工业生产等许多领域，在生物化学和分子生物学的教学和科研中具有重要作用。[1-2]我校自2009年为医学专科学生增开该实验以来，受到广大学生的欢迎，收到良好的教学效果。本实验在实际的操作过程中由于实验试剂、耗材准备比较复杂，微小的疏忽都会导致实验的失败，在长期的实验准备和教学过程中，我们总结了一些教学经验和教学体会。

一、实验前准备

实验设备及材料的准备。待测DNA，琼脂糖，电泳仪，电泳槽，紫外透射反射仪，酒精灯，100ml烧杯，微量移液器，三羟甲基氨基甲烷，盐酸，醋酸钠，EDTA，琼脂糖，溴酚蓝，溴化乙锭。

二、实验课中

1.琼脂糖胶的制备。本实验配制的是质量浓度为1%的50mL凝胶。在电炉上将胶熔至清澈透明的溶液状，冷却到60℃左右，加染料GV（GoldView），每100ml胶加5pl，摇匀，倒入事先装好的水平电泳槽内，梳子根据样品量选用。凝胶厚度一般为0.3～0.5cm。待凝胶完全凝固后（于室温放置30～45min），在梳子齿附近加入少量电泳缓冲液，然后缓慢轻轻地向上拔掉梳子，将凝胶放入电泳槽中。

2.点样。点样量要根据点样孔大小和样品浓度确定，一般上样体积约5～10uL。点样前，样品需按照配比添加上样缓冲液，吹打均匀后，移液器吸取样品，垂直于点样孔，用另一只手帮助固定移液器下端，移液器枪头尖端进入点样孔即可将样品注入孔内，注意不可将枪头尖端插至孔底，并选择其他点样孔点上适合的DNA分子量标准（DNA Marker）。所谓适合是指样品DNA分子量大小应基本在DNA分子量标准范围之内。

3.电泳。将电泳仪的正极与电泳槽的正极相连，负极与负极相连。核酸带负电荷，从负极向正极移动，胶的点样孔一端应放在电泳槽的负极接线一端。电泳槽中电泳缓冲液与制胶用电泳缓冲液应相同，电泳缓冲液（1xTBE），使其恰好没过胶面约lmm。电泳缓冲液太多则电流加大，凝胶发热，设置好电源，一般采用恒压电源，电压选择为5V/cm左右（长度以两个电极之间的距离计算）。电泳时间一般为30～60min，根据实验需要也可做适当调整。电压增高，电泳时间缩短，核酸条带相对来说不够整齐，不够清晰；相反，电压降低，电泳时间较长，核酸条带整齐清晰。将电泳后的凝胶放在紫外透视仪中观察结果，对照DNA marker分析条带、得出结论并分析实验成败的原因。

4.重视实验结果分析，指导填写实验报告。生化实验的目的主要是加强理解和验证相关理论，通过实验操作获得和提高实验技能，培养学生的动手能力。通过实验结果分析提高综合分析的能力，实验报告在一定程度上起到检验学生对实验原理、目的、实验结果的理解和分析的能力。在过去的实验报告中，学生由于不知道如何最终来书写实验报告，所以盲目抄书或者相互抄袭的现象很多，实验结论往往简单了事，这样根本无法达到实验的预先效果。有效地利用实验课后的十分钟时间给学生讲解如何书写实验报告，可以在一定程度上杜绝相互抄袭的现象，既培养学生养成严谨求实的学风[3-5]，又真正地让学生在实验中得到收获。

三、实验课后

1.认真批改实验报告册，及时返还学生。在实验教学中，教师始终要求学生在书写实验报告时如实反映实验结果，不得抄袭或者编写实验结果，这样教师在批改实验报告册时才能更好地发现实验失败或者出现偏差的原因，并在报告册中一一进行修改；同时，批阅实验报告册还能帮助教师发现一些在以往教学中容易忽视的问题，对于完善今后的实验教学有着深刻的意义。其次，批阅后的报告册及时返还学生，可以帮助学生有效地回忆起实验中操作不当的地方究竟出现在何处，避免在今后的实验过程中再犯类似的错误。

2.课后思考。在参考了其他医学院校的实验教程，我校琼脂糖凝胶电泳实验课的成功开设，是我校生物化学实验改革的一大举措。随着分子生物学实验在医学研究中的地位不断增强，开展一定比例的生化分子实验无疑将为学生今后开展设计性、综合性实验奠定下坚实的基础[6-11]。

总之，只有不断总结经验，探索适合医学专科生物化学的新实验，增加学生学习的积极性、主动性，才能培养出面向2l世纪具有综合能力和创新意识的高素质医学人才。

参考文献：

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第一作者简介：周俊萍（1978-），女，云南昆明人，讲师，研究方向：生物化学及分子生物学。